最近要做细菌电转化,找遍了全校只有一台 BTX的Ecm2001电转仪,好像是专门做细胞的,功能倒是挺强大的,只不过好像说明书没有提到细菌转化,请问细胞电转仪可以用来电转细菌吗?
因为我按照电转仪系统预设的条件电转K562细胞,只是人家公司用的2mm的电转杯,我用的4mm的电转杯,电转效率超低,只有百分之几,想问一下这跟电转杯有关系吗?
求助: 最近用BIO-RAD gene pulser Xcell 做HL-60细胞电转,条件为:Volts:250V,Internal:1 ,电击一次,细胞密度为8.0*106,状态佳,电击结束后,发现细胞死亡率为80%,48小时后加入G418,筛选21天后撤药。现在电转后有50天,仅见2-3个细胞存活,但未见生长迹象。
我用的是伯乐的电转仪,2mm电转杯,感受态先离心,沉淀+50ul(10%甘油+0.5M蔗糖)+3ug质粒直接调到金葡菌的条件去电转的。最近一次电转有许多菌落长,开始做菌落pcr也有阳性的,但是之后摇菌再去做就全部是阴性了。
啊?怎么会那?我觉得也许是你做的还不够熟练,我给你提两点一定要注意的问题:第一电转化后一定要立即加入SOC培养基,慢了大肠杆菌细胞死亡的较多,筛选不到重组子,第二感受太细胞的浓度一定要浓,50ml培养体系最后用500ul的10%的甘油溶解,如果你的电转仪达不到我说的条 …
今天用BIORAD电转仪作电转化,结果电转杯冒火花,显示屏上出现:“no pulse prov-ided ARC detected ”字样。请问这是什么问题,该怎么解决。请达人指教,谢谢:)
我做的电转( BTX 600电转仪),供参考: 电转化步骤: ⒈1ulDNA加入50ul:)感受态细胞,混匀,加入电转杯中(0.2cm),置于冰上2—4min; ⒉电转参数: V=2500V C=0.025 R=186 TimeConstart=RC=5s ⒊电转后立即将感受态细胞加入到37℃预热的1mlSOC中; ⒋转入EP管中,200rpm,37℃振摇>30min; ⒌5000rpm,2min离心,去上清800ul ...
我做电转有一个月了,可是电转化效率很低,仅转化空质粒pcomb3做阳性对照,才达到10的6,7次方,如果用于建库的话,是不是太低了?我用的电转仪是btx 的ecm830,参数:500v,20ms,一个脉冲。电容,电阻不可调。感受态菌为tg1。
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我用的电转仪是eppendorf Multiporator 以前没有做过电转化,最近做质粒转染细胞的实验,怎么都转不进去,然后老师让做电转,从来都没有做过。 想问问各位做过的大神, 1.电转的缓冲液是自己配的还是你们在试剂公司买的呢?我看说明书上的是:eppendorf hypoosmolar ...